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021-65232515
EA02A\00 2016-01版
豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體(IgG)診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)說明書
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱:豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體(IgG)診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
英文名稱:Diagnostic Kit For Antibodies To
Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus(PRRSV Ab),ELISA
【規(guī)格】
96T×2/盒
【預(yù)期用途】
本試劑盒主要目的是測(cè)定豬血清中豬藍(lán)耳病毒抗體,可用于評(píng)估感染豬的血清學(xué)診斷以及豬藍(lán)耳病毒疫苗免疫狀況分析。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒應(yīng)用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)原理,由包被有高純度的豬藍(lán)耳病毒抗原的微孔反應(yīng)板、辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應(yīng)機(jī)理為包被抗原與樣本中的PRRSV-Ab結(jié)合,再與酶標(biāo)抗豬IgG抗體形成“包被抗原+PRRSV-Ab+酶標(biāo)抗豬IgG抗體”復(fù)合物,加入顯色劑,通過酶催化反應(yīng)顯色。顯色深淺與PRRSV-Ab的量成正比,當(dāng)樣本反應(yīng)顯色后,經(jīng)酶標(biāo)儀檢測(cè)所得結(jié)果超過設(shè)定的臨界值時(shí)結(jié)果判為陽性,即表明免疫產(chǎn)生了抗體或有自然感染存在。
【主要組成成份】
1 | PRRSV抗原包被板 | 96T×2 | |
2 | 酶標(biāo)記物 | 22ml | 黃色帽 |
3 | 樣本稀釋液 | 50ml | 透明帽 |
4 | PRRSV-IgG陰性對(duì)照血清 | 1.5ml | 綠色帽 |
5 | PRRSV-IgG陽性對(duì)照血清 | 1.5ml | 紅色帽 |
6 | 顯色劑 | 12ml×2 | 橙色帽 |
7 | 終止液 | 12ml | 藍(lán)色帽 |
8 | 20X濃縮洗滌液 | 50ml | 白色帽 |
9 | 蓋板膜 | 2張 |
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10 | 說明書 | 1份 |
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【自備器材】
1.酶標(biāo)儀,雙波長(zhǎng)450/630nm濾光片
2.微量移液器(單道1-100ul、0.5-10ul、多道30-300ul)
3.水浴箱或恒溫箱
4.微量振蕩器
5.一次性槍頭(10ul,200ul)
6.去離子水
【樣本要求】
1.本試劑檢測(cè)的樣本為豬血清,樣本應(yīng)無菌采集,2℃~8℃貯存應(yīng)不超過一周,長(zhǎng)期應(yīng)在-20℃以下保存。
2.避免使用嚴(yán)重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長(zhǎng)菌及含疊氮鈉血清樣本。
【實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備】
1.試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實(shí)驗(yàn)前,先取出置室溫30min,可以獲得jia結(jié)果。.
2.樣本稀釋:用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋,稀釋的樣本混合均勻能取得較好結(jié)果。
3.配制洗滌液:將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋20倍(例:將50ml洗滌液加入950ml去離子水中)。若20倍濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶,屬正?,F(xiàn)象,放置37℃至溶解后即可。
【檢驗(yàn)方法】
1.加樣:根據(jù)樣本數(shù)量,取所需板條,檢測(cè)時(shí),設(shè)陰、陽性對(duì)照各2孔,分別加入不用稀釋的陰、陽性對(duì)照血清100μl于相應(yīng)孔中(可不設(shè)空白對(duì)照)。其余為樣本孔,每孔加100μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本(可做單孔也可雙孔檢驗(yàn))。
2.溫育:加樣后,蓋上蓋板膜,置37℃溫育30分鐘。
3.洗板:甩去孔內(nèi)液體,用洗滌液注滿反應(yīng)板孔,靜置10s左右,直接甩出,洗滌3次,后一次洗滌后拍干板內(nèi)液體。
4.加酶:每孔加酶標(biāo)記物100μl。
5.溫育:加好酶標(biāo)記物后蓋上蓋板膜,置37℃溫育30分鐘。
6.洗板:同步驟3。
7.顯色:每孔加顯色劑100μl,振蕩混勻,37℃避光反應(yīng)10分鐘。
8.終止:每孔加終止液50μl,振蕩10秒,充分混勻,終止后即讀數(shù)。
9.讀數(shù):以450nm/ 630nm雙波長(zhǎng)檢測(cè),讀取各孔吸光度值(OD值)。
【結(jié)果判定】
在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔的OD值。檢測(cè)結(jié)果有效的條件是陽性對(duì)照孔的平均OD值≥0.6,陰性對(duì)照孔的平均OD值必須<0.15;樣品中抗體存在與否,或樣本中抗體的相對(duì)水平的高低由S/P值決定,S/P值計(jì)算時(shí)按以下方式處理:
S/P=(樣本OD450/630值-NCx(—))/(PCx(—)-NCx(—)),其中NCx(—)表示陰性對(duì)照孔平均OD450/630值,PCx(—)表示陽性對(duì)照孔平均OD450/630值;
當(dāng)樣本的S/P≥0. 2時(shí)判為陽性;樣品S/P值<0.2時(shí)判為陰性;
若進(jìn)行大量樣本檢測(cè)時(shí),可使用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行分析數(shù)據(jù)結(jié)果,該軟件可登陸本公司*網(wǎng)站下載。
【注意事項(xiàng)】
1.本試劑盒僅供研究使用。
2.不要使用過期的試劑盒組分,不要把不用批次的組分混合使用。
3.使用試劑盒之前,一定要仔細(xì)閱讀說明書。
4.本試劑盒應(yīng)按含有傳染性材料對(duì)待,試驗(yàn)廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘,或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。
5.微孔板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)在室溫中平衡至潮氣干盡后方可拆開,未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔袋并密封2℃-8℃保存。未用完的液體試劑應(yīng)蓋好瓶蓋,與其它配套組份放入試劑盒中于2℃-8℃避光保存。
6.應(yīng)用微量移液器加入樣本及試劑,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性。
7.加洗滌液時(shí)應(yīng)做到滿而不溢,防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。
8.終止液有腐蝕性,若濺到皮膚或衣物上應(yīng)立即用大量清水沖洗干凈。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
于2℃~8℃避光保存,防止冷凍,有效期12個(gè)月。
【生產(chǎn)日期及批號(hào)】
詳見包裝袋和外包裝盒。
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