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BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞說明書
更新時間:2015-06-16 點擊量:1249

BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞說明書

 

 

BL21(DE3) Competent Cell

BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞

目錄號:YJ0809

 

保存條件:-80℃保存。

 

組分說明

 

                  Cat. No.                          YJ0809A

                  Size                              10×100 μl

                  BL21(DE3) Competent Cell          10×100 μl

                  Control DNA pUC19,0.1 ng/μl         10 μl

 

產(chǎn)品簡介

 

  本產(chǎn)品是大腸桿菌  BL21(DE3)菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞,可用于

DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。BL21(DE3)菌株適合表達非毒性蛋白,該菌株是以T7 RNA聚合酶為

表達系統(tǒng)的外源基因蛋白表達的宿主。T7噬菌體RNA聚合酶基因的表達受λ噬菌體

DE3區(qū)的lacUV5啟動子調(diào)控,該區(qū)整合在BL21染色體上。使用pUC19質(zhì)粒檢測,轉(zhuǎn)化

效率可達10 7

 

 

本產(chǎn)品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途 

 

 

    注意事項

 

    1.感受態(tài)細(xì)胞一定要用干冰運輸。感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)在  -80℃下保存,不可多次凍融和放

       置時間過長,以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

    2.轉(zhuǎn)化所有步驟均在無菌條件下操作。

    3.包裝中有0.1 ng/μl的pUC19DNA,供對照試驗使用。

 

    操作步驟

 

    1.取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl,可以根據(jù)實際情況分裝使用。

       以下實驗以50 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。

    2.待感受態(tài)細(xì)胞融化后,向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(根據(jù)實際情況加入適量

       的DNA,通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30分鐘。

    3.42℃熱擊45秒,迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,冰上靜置2-3分鐘。

    4.每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床,150 rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇。

    5.根據(jù)實驗需求,取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞,加到含相應(yīng)抗生素的   SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,

倒置培養(yǎng),37℃培養(yǎng)12-16小時。

 

       注意:1)涂布用量可根據(jù)具體實驗調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多,可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板;若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少,可取200-300 μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計的克隆數(shù)較少,可通過離心(4,000 rpm,2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于平板中。

2)新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干,可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。

3)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少,可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。

 

 

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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